實時熒光定量PCR標準品稀釋法

實時熒光定量PCR是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料，利用熒光信號積累對PCR反應的過程，進行實時監控實現起始模板的準確定量。實時熒光定量PCR標準品梯度稀釋方法依次是選擇目標、提取/PCR、純化、測試濃度、調整濃度、梯度稀釋。一般CT值在18-30之間，覆蓋全部樣品濃度區間。和大家在分享一下10倍連續梯度稀釋方法：1V原液（標準品為i）+9V稀釋緩沖液，得到標準品為ii。1V標準品ii+9V稀釋緩沖液，得到標準品為iii, 1V標準品iii+9V稀釋緩沖液，得到標準品為iv, 1V標準品iv+9V稀釋緩沖液v,切不可用標準品i分別加不同體積的稀釋緩沖液直接得到標準品ii、iii、iv、v，標準品要復管做測試，復管次數要遵循統計學要求。熒光PCR凍干時，制品溶液厚度不宜過厚。一般應為10-15mm，制品過厚的情形類似于濃度過高時的情況，不僅干燥的時間更長，塌陷、結塊。凍干機Pilot3-6T醫療應用涉及產品有：熒光PCR、免疫微球、化學發光、基因芯片、量子點、ELISA、膠體金、POCT、IVD校準品質控品校準品、內毒素檢測試劑、血清、白蛋白、干細胞及相應提取物等。